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1、金标法C-反应蛋白全血定量检测方法发布时间:02年[$mon原理：ycoCard CRP是一种固相的夹心法免疫试验。

2、稀释后的样品加于卡片上6个试验孔中的1孔，标本流过反应膜，CRP分子即被固定于膜上的CRP特异性单克隆抗体所捕获，CRP将和随后加入的胶体金抗体结合物相结合，发生双抗体夹心法的反应。

3、未结合的金标抗体，用一滴洗涤液将其从膜上清除，滤纸层将吸收过剩的液体。

4、在标本中CRP达到病理的水平，膜上出现紫红色，颜色的强度和CRP浓度比例有关。

5、颜色的强度可以用肉眼观察和参考比色卡相比较作出半定量的估计，或者用NycoCard READER金标定量仪作定量测定。

6、特异性：----在试验中应用了抗人CRP的特异的单克隆抗体。

7、没有发现其他的血液成份在这个NycoCard CRP试验系统中有交叉反应。

8、标准化：NycoCard CRP全血法是以CRM470（IFCC／BCR／CAP参考品）所校准的。

9、测定范围：CRP 10－200mg／L精确度：在质控实验室的试验，通常可得到的精确度是变异系数（CV）5－8％。

10、这和整个测定的范围，也和仪器读结果有关。

11、干扰因素：用肝素、枸橼酸钠或EDTA不影响试验。

12、增高的胆红素水平、脂类或类风湿因子（RF）不影响试验的结果。

13、当血球比积大于50％，应该加以校正。

14、试验盒组成，（48人份）试验卡片：4×2PCS每个试验卡片有6个试验孔，这些孔下方垫有渗水的包被抗CRP单克隆抗体的膜。

15、R1 稀释液：2×26×1.0ml硼酸盐缓冲液（PH9.0）及洗涤剂。

16、R2结合物：1×3.0ml含有用胶体金标记的抗CRP单克隆抗体的磷酸盐缓冲液。

17、R3洗涤剂：1×4.5ml磷酸盐含钠缓冲液（PH7.4）及洗涤剂。

18、阳性质控品：1×0.5ml加入纯化的CRP的人血清。

19、CRP浓度在标签上。

20、毛细吸管：50支25ul含有肝素钠的玻璃毛细管。

21、滴吸管：2支分别用于R2结合物（黑帽）和R3洗涤液（白帽）参考色谱图：1只在塑料棒上带有颜色区带，指示出从10到200mg／L的5个CRP水平。

22、为了肉眼观察的结果作解释。

23、塑料袋：2只1个袋存放已使用的卡片，多余的卡片储存在另一袋中。

24、但试剂盒不提供需用的材料：25ul吸管及吸管头，加标本时用。

25、注意点：试剂盒有叠氮钠，有毒性，在RR2及R3中的浓度为0.02％，在阳性对照物中<0.1％。

26、R1含有清洁剂，对眼及皮肤有刺激。

27、阳性对照品的制备是用斯堪的那维亚血液中心志愿献血员的血，各个经检查乙肝S抗原，丙肝抗体及HIVI和II抗体为阴性。

28、虽然如此，处理质控品应当像对病人标本一样谨慎小心。

29、稳定性及储存在到期的日期内使用，要求试剂盒在密封的状态，在原始的容器内，储存在2－8℃。

30、避免直接的阳光，避免在30℃以上的温度下暴露，不能冰冻。

31、应完全按照指导使用试剂盒。

32、R1：存放在冰箱或室温下，在效期之前是稳定的，临用前放到室温下（15－25℃）。

33、R2和R3，打开的：在2－8℃是稳定的直到有效期，在15－25℃（工作完毕后置冰箱），4星期内是稳定的。

34、试验卡片，打开铝箔袋：在2－25℃（工作完毕放冰箱）四周是稳定的，剩下的卡片在2－8℃保持12个星期，在15－25℃为4周。

35、各个都要关紧塑料袋口和试剂盒一起保存。

36、已开封的对照品：在2－8℃下4周内是稳定的，要无污染。

37、血标本（抗凝）：在2－8℃稳定3天。

38、用R1稀释的血标本：在2－8℃保持8小时。

39、此外，用R1稀释的EDTA血在细胞完全溶解后应立即测定。

40、试验步骤重要的操作注意点·不能使用不同批号中的试剂·在应用前把R1稀释液带入室温（15－25℃）·R2结合物，R3洗涤液及试验卡片能在冷或平衡到室温应用。

41、·在试验孔的下面注上病人或质控鉴别·吸管头或手不能接触试验膜·在每步加液之间换吸管头·在用后将螺帽旋紧标本材料：带有或不带有抗凝剂（肝素、枸橼酸盐或EDTA）的毛细管血及静脉血都能用。

42、质量控制：阳性控制品应当用来证实试剂的功效及试验的正确操作。

43、这控制品的试验按照病人标本的同样操作。

44、测定值应当在标贴上标明的范围以内。

45、操作步骤：1． 标本稀释加25ul血标本或质控品到含有R1稀释液的试管中，盖紧试管并有力地混匀达10秒。

46、如静置试管至少45秒。

47、注意：R1稀释液必须达到室温，轻轻揩去毛细管外面或吸管头外面过剩的液体。

48、在加到卡片以前用眼观察，确保稀释的样本是澄清的。

49、2． 样本的使用加入25ul稀释的血样本或稀释的质控品于预定的反应孔。

50、使稀释的样本浸湿卡片（10－20秒）。

51、注意：轻轻地揩去吸管头外面过剩的液体。

52、3． R2结合物的使用加1滴（或50ul）结合物（黑盖）于试验孔。

53、让结合物浸湿卡片（20－30秒）。

54、注意：吸管头应当垂直，并在试验孔上方约1cm。

55、4． R3洗涤液的应用加1滴洗涤液（白帽）到试验孔。

56、使溶液浸湿卡片，在读结果前使颜色稳定（20－30秒）。

57、在5分钟内读取结果。

58、注意：吸管头应被垂直握着，并在试验孔上方1cm。

59、结果判读肉眼观察：样品的CRP浓度是将试验的反应和参考图谱相比较之后被估计的。

60、色谱的区带符合于下面的血样本的血清部分中的CRP浓度：10mg／L，25mg／L，50mg／L，100mg/L，200mg／L试验结果被推荐以下方式作报告：试验反应的颜色 CRP浓度比10mg／L区带的颜色浅 ＜10mg／L和区带等同 和区带一致在2个区带之间 估计值在2区带之间比200mg／L区带的颜色深 ＞200mg／L仪器测读NycoCard READER作为定量测定其结果。

61、按照仪器手册读结果。

62、血球比积的影响：血球比积超过50％的样本，其试验结果应该按表随各个系数而增加。

63、血球比积％ 50 55 60 65 70 75 80系数 1.2 1.3 1.5 1.7 2.0 2.4 3.0血容比积参考范围：女子35－44％ 男子39－48％正常CRP水平（≤10mg／L）血清CRP参考范围通常报告在10mg／L以下。

64、NycoCard CRP结果等同或小于10mg／L被认为是正常的。

65、增高的CRP水平（＞10mg／L）CRP水平大于10－15mg／L通常被认为是病理性的。

66、病毒及轻度细菌感染，CRP浓度适度增加（达50mg／L）。

67、当严重的细菌感染就显著增加（大于60mg／L）。

68、注意事项·在加样本到试验孔时开成气泡，应重新试验·血细胞溶解不完全。

69、R1洗涤液需放在室温（15－25℃），有力地混匀稀释的样本（约10秒）。

70、将试管放置至少45秒。

71、·由于离白血球水平（＞60×109／L）、纤维物质及血细胞不完全溶解，而减少样本流过滤膜。

72、如果在15－25℃溶解时间之后稀释样本仍然混浊，离心，用上清液加到卡片上。

73、·不准确的吸管要进行校正吸管。

74、·在R2结合物完全浸湿卡片之前就加R3洗涤液，这将导致假阳性结果。

75、·血细胞不完全溶解或渗滤受阻也可能导致假阳性结果。

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