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1、一、酶解-树脂法酶解取100kg新鲜肠黏膜(总固体5%-7%)，加苯酚200ml (0.2%)，如气温低时可不加。

2、在搅拌下加入绞碎胰0.5-1kg(0.5%-1%)。

3、用 300-400g/L(30%-40%)NaOH溶液调节pH8.5-9，升温至40-45℃，保温2-3h。

4、pH8,再加5kg粗食盐(5%)升温至90℃左右,用6mol/L HCl调节pH 6.5左右,停止搅拌,保温20min,以布袋过滤,得酶解滤液。

5、二、盐解-树脂法提取 取新鲜猪肠黏膜投入反应锅中，按30g/L(3%)加入氯化钠，NaOH调节pH9，逐步升温至50-55℃。

6、保温2h，继续升温至95℃，维持10min，冷却50℃以下，用30目双层纱布过滤,收集滤液。

7、猪肠粘膜[NaCl;；NaOH]→[pH9；50-55℃]滤液吸附、洗涤、洗脱、沉淀 取冷却50℃以下的滤液，加入714型(强碱性)Cl-型树脂(新树脂用量为2%),搅拌8h后静置过夜。

8、三、CTAB*提取法(*十六烷基三甲基溴化胺为长链季铵盐)提取、络合 按猪肠黏膜液(V)：Na2SO4(m)：硫酸铝(m):CTAB(V)=1:0.15:0.04:0.001的配料比投料。

9、取新鲜猪小肠黏膜投入反应罐中，搅拌下加入硫酸钠，溶解后，用碱液调节pH11-11.5，升温50℃，保温搅拌2h。

10、再加硫酸铝，溶解后，用氢氧化钠调节pH7.5-8，升温至95℃,保温10min。

11、扩展资料：肝素的检测：APTTAPTT依然是作为监测UFH的选择之一。

12、它是非常简单，快速和便宜的项目。

13、然而，却难以标准化。

14、APTT检测需要整个凝血瀑布中的所有蛋白都是完整的，从而可以准确测量肝素水平。

15、2、硫酸鱼精蛋白中和试验该试验是基于UFH，一个高度负电荷的分子，被硫酸鱼精蛋白，一个正电荷的蛋白，中和的原理。

16、配备不同浓度的硫酸鱼精蛋白加入血浆中，再加入凝血酶，测量凝固时间。

17、将凝血酶凝固时间恢复至正常的硫酸鱼精蛋白浓度就被认为是肝素的浓度。

18、3、抗Xa活性检测发色底物法检测肝素抗Xa活性的原理都是一样的：标本中的肝素与AT形成复合物，抑制过量添加的Xa因子。

19、剩余的Xa因子活性的测量，通过其与特异的底物作用，释放出pNA来进行。

20、参考资料来源：百度百科—肝素参考教材《动物药物提取制备实用技术》 1．备料：取冰冻牛肺脏融化后，剪去主气管和较大的气管，然后剪成长条，用3毫米绞板绞磨成肉糜状，净肺糜量为毛肺的70％～80％。

21、2．自溶：取牛肺糜300千克，加水150升，搅拌均匀，加温至45℃，加入6升甲苯，在39～41℃保温自溶20小时，每半小时搅拌1次。

22、3．提取：将27千克硫酸铵溶于90升水中，加入自溶液内，用40％氢氧化钠溶液调至pH值8.8～9.2。

23、用水浴加热至50℃，保温搅拌2.5小时开始过滤；滤饼加100升水、6千克硫酸铵再提取1次。

24、弃去滤渣，合并2次提取液4．酶解：提取液按每公斤牛肺重量加1.5克2709碱性蛋白酶PH控制在9.0在50度条件中反应2.5小时；调盐度4度升温到90度保温15分钟过滤后续工艺经吸附-洗涤-洗脱-酒精沉淀-干燥-干燥品盐水稀释过滤-再次吸附-洗脱-酒精沉淀-干燥即可-得2.5至3吨牛肺提取1亿单位的牛肺肝素钠肝素钠提取专利 2、利用废脱附盐水加工粗品肝素钠的方法 3、一种吸附肝素钠专用树脂的生产方法 4、肝素的喷雾干燥方法 5、生产肝素的方法 6、一种肝素及其制备方法 7、利用猪、牛、羊肺沉淀法生产肝素钠 8、利用生产肝素钠后废液提取冠心舒工艺 9、用活化生物酶解法提取肝素钠的生产工艺 10、免树脂长链季铵盐沉淀法提取肝素钠 1低分子肝素及其制备方法 12、一种用综合生物法提取肝素钠的新工艺 13、一种低亚硝酸盐含量的低分子肝素钙的制备方法 14、一种肝素钠及其制备方法 15、一种肝素化合物及其制备方法和应用 16、肝素银的制备及其应用 17、一种制备低分子量肝素的方法 18、含有肝素锌的组合物及其应用 19、低分子肝素纯化方法 20、利用动物肺提取肝素钠粗品的制备工艺 2酶解法生产肝素钠 22、一种从牛肺中提取抑肽酶和肝素钠的联产工艺 23、一种低分子量肝素钠及其亲和层析制备方法 24、肝素钠粗品生产方法 25、粗品肝素钠分离纯化为高纯度肝素钠的方法 26、一种同步提取肝素钠和猪肠粘膜抗菌肽的方法 27、肝素钠副产物中分离提纯硫酸皮肤素和低分子硫酸乙酰肝素的方法 28、一种依诺肝素钠的纯化生产方法 29、低分子肝素或者其盐、含有其的医药组合物及其制造方法 30、肝素钠生产工艺方法 3低分子量的肝素及其制备方法 32、肝素钠吸附树脂中残留有效成分的提取方法 33、使用HPLC定量测定具体组成肝素或低分子量肝素的方法 34、采用卵磷脂液膜分离法提取肝素的方法 35、一种低分子量肝素钙生产工艺 36、壳聚糖及其衍生物与低分子肝素形成的复合物及制剂与制备方法 37、一种类肝素的制备方法 38、肝素钠生产中所用的液体射流吸附、解析装置 39、肝素提取装置 40、一种利用肠衣生产肝素的设备 4低分子肝素钠（钙）及其制备方法 肝素钠提取文献资料 42、酶降解法精制肝素钠 43、牛肺肝素钠提取工艺研究 44、浅谈肝素钠及其生产 45、提高肝素钠粗品效价的生产工艺 46、一种提高肝素钠收率和效价的方法 47、一种新型沉淀剂去除肝素钠中蛋白质的条件研究 48、影响肝素钠产量关键因子的研究 49、猪肺提取肝素钠新工艺 50、猪肺提取肝素钠新工艺 2 5猪小肠生产肝素钠粗品技术的创新及应用 52、D-254树脂在肝素钠精制过程中的应用 53、凹凸棒土和活性炭除去肝素钠精品制备过程中杂质 54、层析技术在肝素钠纯化中的应用 55、沉淀剂YNB99-1在肝素钠精制中的应用 56、从牛肺提取精品肝素钠工艺的研究 57、从猪大肠腌液中提取肝素钠的研究 58、从猪小肠粘膜中提取肝素钠的生产技术改进 59、粗品肝素钠质量情况和效价范围的判断 60、对“肝素钠生产工艺”的补充 6肝素钠粗品工业化高效生产工艺的探讨 62、肝素钠粗品生产工艺 63、肝素钠的三氯化铝精制工艺 64、肝素钠的生产及其存在的问题和解决的方法Ⅰ 65、肝素钠的生产及其存在的问题和解决的方法Ⅱ 66、肝素钠的生产及其存在的问题和解决的方法Ⅲ 67、肝素钠精制工艺研究 68、肝素钠的提取 69、肝素钠分离工艺研究 70、肝素钠简单生产工艺介绍 7肝素钠精品生产工艺的改进 72、肝素钠精制工艺探讨 73、肝素钠精制工艺研究 1 74、肝素钠精制工艺研究 2 75、肝素钠精制工艺研究 3 76、肝素钠生产过程中对重金属的处理 77、肝素钠生产中间产物效价的检测 78、肝素钠树脂精制工艺的研究 79、肝素钠制备工艺研究 80、含高浓度无机盐的肝素钠废水的处理 8均匀设计法筛选肝素钠的纯化条件 82、利用动物小肠提取肝素钠的技术及生产工艺肝素钠精制新工艺本工艺采用酶解结合氧化法精制肝素，在该过程中采用低温离心技术,解决在除酸性蛋白过程中，粗品肝素钠中残留杂蛋白在纯化过程中很难被除去的缺点。

25、在粗品肝素钠中加入胰蛋白酶对这些杂蛋白进行酶解,再结合一次氧化除杂过程,从而提高精品肝素钠的效价和效价回收率。

26、工艺流程2、溶解称取适量肝素钠粗品加质量分数3%左右NaCI溶液进行溶解。

27、50℃水浴加热，用NaOH溶液调pH至8.0静置2小时，过滤除不溶性杂质。

28、3、酶解法除蛋白肝素在动物体内是以肝素-蛋白质复合物的形式存在，通过酶解或盐解去除复合物的蛋白质成分，游离肝素。

29、但在实际生产过程中，复合物的解离，蛋白质的除去是不完全的，粗品中总存在数量不等的蛋白质。

30、粗品肝素钠必须经过精制，可以进一步去除粗品中残存的结合蛋白质，不仅因杂蛋白的去除而提高效价，而且因被“掩蔽”的肝素活性得到释放而获得较高活性。

31、为此，利用蛋白水解酶专一水解蛋白的特点，并结合调酸除蛋白和氧化除蛋白方法,采用酶解除蛋白法，该法能在除去蛋白质时较少影响肝素总效价。

32、在肝素钠溶液中加入少量的胰蛋白酶，使残留在肝素中的少量蛋白质降解成小分子肽,从肝素-蛋白质复合物中解离出来，再结合调酸碱和氧化法除蛋白,制得精品肝素钠的效价和效加回收率均有不同程度提高。

33、酶解反应条件：蛋白酶加入量0.05%， pH 7~9， 温度40℃，反应时间5h。

34、4、调酸除蛋白在调酸除蛋白过程中，为防止肝素失活,加入亚硫酸氢钠作保护剂。

35、在低温下离心脱除蛋白。

36、5、氧化条件H2O2用量2/% pH8.5，温度25~27℃，时间15h。

37、6、沉淀 将氧化液调pH6.5，加人等量的95%乙醇沉淀。

38、抽出上清液得沉淀物，将沉淀物慢慢加无水酒精或丙酮中脱水。

39、7、干燥55℃，真空干燥3小时以上即得精品。

40、采用酶解结合过氧化氢一次氧化的肝素钠精制工艺，产品较白，且效价和效价回收率均高于二次氧化方法，效价达150U/mg以上，效价回收率达95 %以上。

41、将新鲜的猪肠粘膜按每付加水约4kg的比例稀释，加工业食盐调至波美度为6.5，用30%~40%NaOH溶液将pH调至9.5，加热搅拌，温度升至50度时停止加热，在55度下，搅拌保温3小时，此时将溶液的pH准确调整为8.5，然后迅速升温至105~110度，这时停止搅拌，捞去液面上的杂物。

42、 待温度降至55度时调pH为8.0，加入液体4%已处理好的D204肝素钠专用树脂，搅拌吸附8小时，然后过滤，收集树脂。

43、 用自来水反复冲洗吸附后的树脂，至水变清为止。

44、 用2倍体积的1.4MNaCl洗脱。

45、用2倍的4MNaCl洗脱。

46、 加等体积的乙醇沉淀。

47、真空干燥。

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