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密度梯度离心法(关于密度梯度离心法介绍)

2022-12-29 13:02:31 百科知识 来源:
导读 大家好,小万来为大家解答以上的问题。密度梯度离心法,关于密度梯度离心法介绍这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!1、 密度梯...

大家好,小万来为大家解答以上的问题。密度梯度离心法,关于密度梯度离心法介绍这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!

1、 密度梯度离心法: 液体在离心时,其密度随转轴距离而增加。碱基GC 配对的双链DNA 片段密度较大,利用精密的密度梯度超离心技术可使切割适当片段的不同DNA 按密度大小分布开来。进而通过与某种放射性标记的mRNA 杂交来检验,分离相应的基因。非洲爪蟾rDNA.5sDNA 和海胆组蛋白基因就是这样分离得到的。密度梯度超离心技术不仅可以分离细胞中的DNA,也可以利用它分离到生物细胞中的某些目的基因的mRNA。一般细胞含mRNA 并不丰富,大多数细胞mRNA 只占总RNA 百分之几,mRNA 种类又非常多,各种mRNA 链长短不一,总mRNA 提取出来后,提取到铺在已预制了不同密度层次溶液介质的离心管中,人们可以利用密度梯度超离心技术将大小不同的mRNA 分离在不同密度层次上,然后可以根据所需的mRNA 的大小,在相应层次上提取。 

2、 密度梯度区带离心法(简称区带离心法),是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。此法的优点是:①分离效果好,可一次获得较纯颗粒;②适应范围广,能像差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗粒;③颗粒不会挤压变形,能保持颗粒活性,并防止已形成的区带由于对流而引起混合。此法的缺点是:①离心时间较长;②需要制备惰性梯度介质溶液;③操作严格,不易掌握。 

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